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以外毒素及表面抗原ApfA研發對抗不同血清型之豬胸膜肺炎放線桿菌DNA疫...

呂侑純

以外毒素及表面抗原ApfA研發對抗不同血清型之豬胸膜肺炎放線桿菌DNA疫苗 = The development of DNA vaccines against different serotypes of Actinobacillus pleuropneumoniae using exotoxins and surface antigen ApfA

紀錄類型:	書目-語言資料,印刷品 : 單行本
並列題名:	The development of DNA vaccines against different serotypes of Actinobacillus pleuropneumoniae using exotoxins and surface antigen ApfA
作者:	呂侑純,
其他團體作者:	國立高雄大學
出版地:	[高雄市]
出版者:	撰者;
出版年:	2008[民97]
面頁冊數:	91面圖，表 : 30公分;
標題:	ApfA
標題:	Actinobacillus pleuropneumoniae
電子資源:	http://handle.ncl.edu.tw/11296/ndltd/37288960682865600760
附註:	指導教授：楊文仁
附註:	參考書目：面
摘要註:	豬胸膜肺炎放線桿菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae)是一種革蘭氏陰性菌，已知的15種血清型均能造成感染，導致豬隻肺部損傷，致死率很高。致病因子包括莢膜、脂多醣、外毒素、纖毛和外膜蛋白等。其中外毒素為最重要的毒力因子：ApxI具有最強的溶血性及細胞毒性；ApxII的溶血性和細胞毒性較弱；ApxIII不具溶血性，但對肺泡的巨噬細胞(macrophage)及噬中性白血球(neutrophil)有強烈地細胞毒性，第2、3、4、6、8血清型會分泌，其中第2血清型ApxIII與其他血清型相比，在C端有32個胺基酸不同，可能影響免疫原性。纖毛通常具有高度抗原性，而且可能與菌體吸附宿主細胞的能力有關，apfA為猪胸膜肺炎放線桿菌的纖毛結構蛋白基因，在所有血清型中具有高度保留性。本實驗室先前的研究結果顯示，以外毒素結構蛋白ApxIA、ApxIIA以及兩種外膜蛋白所製成的四價DNA疫苗，對抗第1血清型菌株感染的保護力達70%。為了提升疫苗對抗不同血清型之感染，本研究以外毒素ApxIIIA和纖毛蛋白ApfA做為目標抗原，探討此DNA疫苗之保護力，並分析第2和第8血清型ApxIIIA之免疫原性。首先將ApfA、第2和第8血清型ApxIIIA之基因選殖入能在哺乳動物細胞表現的載體中，以DNA定序確定基因序列之正確性。利用西方點墨法確認目標抗原能正確表現後，將質體DNA轉染入NIH/3T3細胞，以免疫螢光染色法確認目標抗原蛋白能在哺乳動物細胞中表達。將ApfA及ApxIIIA以單價或二價DNA疫苗的型式藉由肌肉注射免疫小鼠，以市售不活化菌疫苗做為陽性對照，PBS及空載體組做為陰性對照，利用第2血清型菌株進行攻毒試驗後存活率如下：PBS及空載體組為0%、ApfA組為30%、第2血清型ApxIIIA組與市售疫苗組為50%、ApfA撘配第2血清型ApxIIIA組為60%、ApfA撘配第8血清型ApxIIIA組為70%，顯示二價疫苗保護效果優於單價疫苗和市售疫苗。以ApfA、ApxIA、ApxIIA及第8血清型ApxIIIA製成四價DNA疫苗，經第1血清型菌株攻毒後存活率為30%，第2血清型菌株攻毒後存活率為70%，顯示此四價DNA疫苗對第2血清型菌株感染可提供較佳的保護力。綜合以上結果，本實驗所研發之DNA疫苗可用來預防不同血清型菌株感染，未來需進一步尋找最佳的抗原組合或佐劑搭配，以提升疫苗的保護效果。 Actinobacillus pleuropneumoniae, a Gram-negative bacterium that all of the 15 serotypes are known can cause infection and lead to lung lesion in pigs with high mortality. Several virulence factors are known including capsule, lipopolsaccharide, exotoxins (Apx toxins), fimbriae, and various outer membrane proteins. The Apx toxins are considered the most important virulence factors. ApxI has strongly hemolytic and cytolytic activity, and ApxII has weakly hemolytic and cytotoxic activity. However, ApxIII is not hemolytic but strongly cytotoxic to porcine neutrophils and pulmonary alveolar macrophages, and is secreted by serotypes 2, 3, 4, 6, and 8. There are 32 amino acids differences in the C terminus of ApxIII of serotype 2 comparing with other serotypes and they should influence the immunogenicity of ApxIII. Fimbriae are usually with highly antigenicity and mediated the attachment ability of bacteria to the host cell. The structural protein gene of A. pleuropneumoniae fimbria, apfA, was found with highly conserved in all serotypes. In the previous study of our laboratory showed that a tetravalent DNA vaccine containing ApxIA, ApxIIA and two outer membrane proteins can provide 70% protection against serotype 1 challenge. To extend the DNA vaccine

以外毒素及表面抗原ApfA研發對抗不同血清型之豬胸膜肺炎放線桿菌DNA疫苗 = The development of DNA vaccines against different serotypes of Actinobacillus pleuropneumoniae using exotoxins and surface antigen ApfA
呂, 侑純

以外毒素及表面抗原ApfA研發對抗不同血清型之豬胸膜肺炎放線桿菌DNA疫苗 = The development of DNA vaccines against different serotypes of Actinobacillus pleuropneumoniae using exotoxins and surface antigen ApfA / 呂侑純撰 - [高雄市] : 撰者, 2008[民97]. - 91面 ; 圖，表 ; 30公分.
指導教授：楊文仁參考書目：面.
ApfAActinobacillus pleuropneumoniae

以外毒素及表面抗原ApfA研發對抗不同血清型之豬胸膜肺炎放線桿菌DNA疫苗 = The development of DNA vaccines against different serotypes of Actinobacillus pleuropneumoniae using exotoxins and surface antigen ApfA
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300 $a 參考書目：面
328 $a 碩士論文--國立高雄大學生物科技研究所
330 $a 豬胸膜肺炎放線桿菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae)是一種革蘭氏陰性菌，已知的15種血清型均能造成感染，導致豬隻肺部損傷，致死率很高。致病因子包括莢膜、脂多醣、外毒素、纖毛和外膜蛋白等。其中外毒素為最重要的毒力因子：ApxI具有最強的溶血性及細胞毒性；ApxII的溶血性和細胞毒性較弱；ApxIII不具溶血性，但對肺泡的巨噬細胞(macrophage)及噬中性白血球(neutrophil)有強烈地細胞毒性，第2、3、4、6、8血清型會分泌，其中第2血清型ApxIII與其他血清型相比，在C端有32個胺基酸不同，可能影響免疫原性。纖毛通常具有高度抗原性，而且可能與菌體吸附宿主細胞的能力有關，apfA為猪胸膜肺炎放線桿菌的纖毛結構蛋白基因，在所有血清型中具有高度保留性。本實驗室先前的研究結果顯示，以外毒素結構蛋白ApxIA、ApxIIA以及兩種外膜蛋白所製成的四價DNA疫苗，對抗第1血清型菌株感染的保護力達70%。為了提升疫苗對抗不同血清型之感染，本研究以外毒素ApxIIIA和纖毛蛋白ApfA做為目標抗原，探討此DNA疫苗之保護力，並分析第2和第8血清型ApxIIIA之免疫原性。首先將ApfA、第2和第8血清型ApxIIIA之基因選殖入能在哺乳動物細胞表現的載體中，以DNA定序確定基因序列之正確性。利用西方點墨法確認目標抗原能正確表現後，將質體DNA轉染入NIH/3T3細胞，以免疫螢光染色法確認目標抗原蛋白能在哺乳動物細胞中表達。將ApfA及ApxIIIA以單價或二價DNA疫苗的型式藉由肌肉注射免疫小鼠，以市售不活化菌疫苗做為陽性對照，PBS及空載體組做為陰性對照，利用第2血清型菌株進行攻毒試驗後存活率如下：PBS及空載體組為0%、ApfA組為30%、第2血清型ApxIIIA組與市售疫苗組為50%、ApfA撘配第2血清型ApxIIIA組為60%、ApfA撘配第8血清型ApxIIIA組為70%，顯示二價疫苗保護效果優於單價疫苗和市售疫苗。以ApfA、ApxIA、ApxIIA及第8血清型ApxIIIA製成四價DNA疫苗，經第1血清型菌株攻毒後存活率為30%，第2血清型菌株攻毒後存活率為70%，顯示此四價DNA疫苗對第2血清型菌株感染可提供較佳的保護力。綜合以上結果，本實驗所研發之DNA疫苗可用來預防不同血清型菌株感染，未來需進一步尋找最佳的抗原組合或佐劑搭配，以提升疫苗的保護效果。 Actinobacillus pleuropneumoniae, a Gram-negative bacterium that all of the 15 serotypes are known can cause infection and lead to lung lesion in pigs with high mortality. Several virulence factors are known including capsule, lipopolsaccharide, exotoxins (Apx toxins), fimbriae, and various outer membrane proteins. The Apx toxins are considered the most important virulence factors. ApxI has strongly hemolytic and cytolytic activity, and ApxII has weakly hemolytic and cytotoxic activity. However, ApxIII is not hemolytic but strongly cytotoxic to porcine neutrophils and pulmonary alveolar macrophages, and is secreted by serotypes 2, 3, 4, 6, and 8. There are 32 amino acids differences in the C terminus of ApxIII of serotype 2 comparing with other serotypes and they should influence the immunogenicity of ApxIII. Fimbriae are usually with highly antigenicity and mediated the attachment ability of bacteria to the host cell. The structural protein gene of A. pleuropneumoniae fimbria, apfA, was found with highly conserved in all serotypes. In the previous study of our laboratory showed that a tetravalent DNA vaccine containing ApxIA, ApxIIA and two outer membrane proteins can provide 70% protection against serotype 1 challenge. To extend the DNA vaccine
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